Из истории эпидемий:

News image

Малярия так же стара, как человечество

Генетическое исследование показало, что паразитические простейшие вида Plasmodiumfalciparum, вызывающие малярию, сопровождали ан...

News image

Легочная чума в свете исторических источников

Первое исторически зафиксированное появление легочной чумы Вопреки существующим сегодня представлениям, что легочные осложнен...

News image

Первая пандемия, РИМ, 541-590 гг

Миллионы людей умерли во время «Первой пандемии», названной «Чумой Юстиниана», которая распространилась по территории Римской им...

News image

СПИД. Первые исследования

СПИД Священники нарекли его предвестником Апокалипсиса, врачи же называли «иммунодефицитом гомосексуалистов». С его возникнов...

Диагностика заболеваний:

News image

Диагностика бактериальных инфекций

А. Микоплазменная инфекция. Ранее считалось, что микоплазмы занимают промежуточное положение между бактериями и вирусами: от вир...

News image

Диагностика вирусных инфекций

В настоящее время широко применяются 4 способа диагностики вирусных инфекций: 1) выделение вируса в культуре клеток (наиболее...

News image

Иммунологические методы диагностики инфекционных заболеваний

I. Иммунный ответ при инфекционных заболеваниях. Иммунный ответ — это реакция на чужеродный антиген, которая приводит к накоплен...

News image

Мифы о диагностике: правда и домыслы

Миф первый. Существует универсальное исследование, позволяющее выявить любую патологию. Каждое исследование проводится с конк...



Designed by:
SiteGround web hosting Joomla Templates
Санитарно-эпидемиологические службы России, Powered by Joomla! and designed by SiteGround


Место качественной модификации метода ПЦР в первичной диагностике ИППП и контроле эффективности лечения
Инфекционные заболевания - Диагностика инфекционных заболеваний

место качественной модификации метода пцр в первичной диагностике иппп и контроле эффективности лечения

В немалой степени успеху полимеразной цепной реакции (ПЦР) способствовало появление на медицинском рынке высокотехнологичных коммерческих тест-систем, значительно упростивших и ускоривших проведение реакции. В то же время применение нового метода поставило и ряд вопросов, один из которых - интерпретация результатов ПЦР.

Высокая чувствительность метода имеет и оборотную сторону - выявляемые десятки и сотни копий микроорганизмов в пробе не всегда достаточны для возникновения заболевания. Положительные результаты ПЦР в отсутствие клинических признаков заболевания (нередко сопровождаемые отрицательными результатами других лабораторных исследований) позволило предъявить обвинения этому методу в гипердиагностике. Открытым остаётся вопрос о трактовке результатов контрольных исследований методом ПЦР: качественный метод не позволяет достоверно оценить динамику популяции возбудителя под влиянием проводимого лечения.

Тест-системы, создаваемые для количественного определения патогенов методом ПЦР, либо обладают меньшей чувствительностью по сравнению с качественными (большинство наборов с внутренним контролем), либо требуют значительно больших затрат расходных материалов (метод последовательного разведения). Кроме того, в условиях использования реального клинического материала нередко наблюдаются парадоксальные ситуации, когда образцы с большим содержанием определяемой ДНК дают более слабое свечение, чем пробы, бедные мишенями , и наоборот.

Целью данной работы была оценка эффективности качественного определения возбудителей инфекций, передающихся половым путём (ИППП) на основании сопоставления частоты их обнаружения до проведения лечения и по окончании терапии.

Материалы и методы.

Материал (моча, соскобы из цервикального канала, уретры, эпителий из заднего свода влагалища, аспираты из полости матки) получали от женщин, обращавшихся за помощью к врачам-гинекологам женских консультаций г. Хабаровска. Всего было обследовано 2112 человек, 1747 из них - при первичном посещении врача и 365 - после проведения лечения. Количество анализов составило соответственно 6728, 6179 и 549. Контрольное исследование осуществляли не ранее, чем через 14 дней (для хламидий - не ранее одного месяца) после окончания терапии. Для проведения ПЦР использовались российские диагностические тест-системы ( горячий старт ) по технологии, рекомендованной производителем наборов. Результаты детекции документировались фотографированием геля на фотоплёнку Микрат-300 . За счёт высокого коэффициента контрастности (? = 4,0) и длительной экспозиции фиксировались полосы амплификата, недоступные для визуального различения. Данные хранились и обрабатывались в СУБД MS Access 97.

Результаты и обсуждение.

Проведённое исследование показало, что Chlamidiatrachomatis и Mycoplasmahominis присутствовали соответственно в 20,5 и 31,8% исследованных образцов (см. Таблицу 1). Частота выявления этих микроорганизмов существенно не отличалась во время первого посещения врача и при контрольном исследовании после лечения. Кажущийся парадокс легко объясним: терапия была назначена тем женщинам, у которых был обнаружен возбудитель заболевания, иначе говоря, - инфицированность в этой группе первоначально составляла 100% а после проведения лечения снизилась для микоплазм втрое и впятеро для хламидий.

M.genitalium в пробах, взятых до начала терапии, встречалась в 9,3% (в контроле после лечения - 6,4%), U.urealiticum - 62,8% (53%). Персистенция цитомегаловируса в цервикальном канале установлена в 21,1% (проводимое лечение снизило этот процент до 13,3), вирус простого герпеса обнаружен в 18,3% (9,1%).

Приведённые результаты с определёнными оговорками позволяют оценить устойчивость различных групп микроорганизмов к терапии (в частности, учитывая того, что большой объём выборки по различным медицинским учреждениям нивелировал особенности схем лечения). Так, практически при одинаковой частоте обнаружения трихомонад и кандид до начала терапии (около 23%), первые впоследствии идентифицированы только у 14,3%, а вторые выявлены у 40% лечившихся женщин. Полученные данные хорошо вписываются в наблюдаемую нами в последнее время картину: трихомониаз и гонорея, в отличие от других ЗППП, стали встречаться реже (это же показывает и Российская статистика). В то же время, рецидивирующие кандидозы и бактериальные вагинозы (БВ) стали настолько обычным явлением (например, последние мы диагносцируем у 26% женщин), что некоторые врачи стали считать их вариантом нормы. Что же показывает проведённое исследование? Gardnerellavaginalis не только чаще других обнаруживает себя в генитальном тракте женщин, но и делит пальму первенства по устойчивости к проводимой терапии (50%) с U.urealiticum (53%) - вторым, едва ли не облигатным компонентом биоценоза влагалища при БВ. О третьем компоненте - Mycoplasmahominis - было сказано выше.

Понимая безусловную неприемлемость полуколичественной оценки ПЦР в каждом отдельно взятом исследовании, мы предприняли попытку использовать данный метод для сравнительной оценки относительно больших групп (женщин до начала лечения и после его завершения). В этом случае девиации, связанные с наличием ингибиторов термостабильной полимеразы и т.п. взаимно гасятся в обеих исследуемых группах, поскольку начинают работать законы статистики для больших популяций.

Интенсивность свечения полосы продукта амплификации сопоставляли с люминисценциейамплифицированного фрагмента соответствующей контрольной ДНК (4 балла, или 4+). Невидимой глазом, фиксированной только на фотоплёнке светящейся полосе амплификата соответствовал 1+. Остальные градации занимали промежуточное положение.

Результаты такого полуколичественного исследования приведены в Таблице. Наиболее интересным нам представляется оценка интенсивности реакции в группе хламидий. Если при первичном исследовании полосы продукта амплификации светились довольно ярко (во все балльные интервалы попало приблизительно одинаковое число проб), то в контрольном тесте явно преобладали крайне слабые (невидимые глазом, но совершенно чётко зафиксированные на фотоплёнке) сигналы. Видимые полосы составили в контроле менее трети от всех обнаруженных!

Как указывалось, контрольное исследование на хламидии проводили через месяц и более после завершения терапии, когда происходило полное замещение клеток призматического эпителия и элиминация находящихся в них погибших ретикулярных и элементарных частиц хламидий. Проводимые контрольные исследования не показали наличия полос в отрицательных контролях . Поэтому приведённые выше результаты не могут быть следствием технологических погрешностей.

По-видимому, приведённые факты должны побудить сделать соответствующие выводы исследователей, игнорирующих применение фотографических или электронных (чувствительная видеокамера? компьютер) технологий фиксации результатов амплификации.

При трактовке результатов ПЦР врач должен учитывать современное состояние вопроса: хламидийная инфекция коварна. Этот вид микроорганизмов представляет собой реальную угрозу для женщины и ребёнка даже в минимальных количествах, выявляемых молекулярно-биологическими методами.

Не существует чётких критериев степени опасности присутствия разного количества CMV и HSV в цервикальном канале, но достоверно известно, что сам факт их персистенции определяет значительно более высокий процент инфицирования ребёнка в родах даже у серопозитивных, обладающих определённым иммунитетом, женщин. При первичном инфицировании частота и тяжесть вирусных поражений многократно возрастают.

Несколько сложнее трактовка выявления микоплазм. Известно, что, например, уреаплазмы могут длительное время персистировать в урогенитальном тракте, не вызывая видимых патологических изменений. Высокий процент обнаружения данного вида микроорганизмов в наших исследованиях также косвенно свидетельствует об отсутствии 100% патогенности. Учитывая побочные действия антибиотиков, при отсутствии клинических проявлений обнаружение уреаплазм не должно служить показанием к антибиотикотерапии (исключение - планируемая беременность - см. ниже), может быть рекомендована коррекция иммунитета. Тем не менее, при воспалительном процессе выявление уреаплазм в отсутствии других патогенов позволяет считать их этиологическим фактором заболевания. Не располагают к благодушию и приведённые выше результаты: U.urealiticum неожиданно оказалась микроорганизмом, максимально устойчивым к проводимой терапии. Многие исследователи указывают на взаимосвязь присутствия уреаплазм в цервикальном канале беременных с преждевременным разрывом амниотической оболочки и излитием околоплодных вод; профилактическая антибиотикотерапия уменьшала как частоту выявления уреаплазм, так и риск преждевременных родов.

Таким образом, при выявлении потенциально патогенных бактерий и вирусов не следует забывать о том, что болезнь есть взаимодействие микро - и макроорганизма. Во многих случаях количественные критерии оказываются неприменимыми: инфекционный процесс может быть гораздо более опасным в присутствии относительного небольшого количества высокопатогенных возбудителей, при активном синергизме патогенов, при временном ослаблении иммунной системы.

Всё это позволяет считать, что даже количественная модификация метода ПЦР может и должна применяться при установлении этиологических факторов заболеваний урогенитальной сферы.

Метод высоко информативен не только при первичной диагностике инфицирования урогенитального тракта, но и при контроле излеченности от ИППП. В сочетании с другими методами диагностики он даёт думающему врачу полную информацию для принятия правильного решения.

 

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить

Профилактические мероприятия:

Емкость для дезинфекции

News image

Дезинфекция медицинских инструментов - это отличный способ избавиться от патогенных и условно-патогенных вирусов, грибов и бактери...

Дезинфекция, дезинсекция, дератизация

News image

Дезинфекция - это меры воздействия на окружающую среду человека по уничтожению возбудителей заразных заболеваний. Дезинсекция - эт...

Купальный сезон открыт! Какие опасности подстерегают отдыхающих на пля

News image

Стартовал купальный сезон. На пляжи стройными рядами потянулся народ. Позагорать, поиграть с друзьями в волейбол и конечно попла...

Тесты по гигиене

News image

Гигиена - это наука, которая изучает процессы влияния факторов внешней среды на организм человека. Целью гигиены является про...

Инфекционные болезни перешли в наступление

News image

Во всех странах мира, независимо от уровня экономического развития, отмечается рост инфекционной заболеваемости, возникают эпиде...

Асептика и антисептика в хирургии

News image

Ни один уважающий себя хирург не станет вести операцию без двух важных методов - асептики и антисептики. Использование обеззаражив...

Авторизация